ELISA實驗失敗的解決方案

1. 試劑盒因素

試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。

不同廠家的試劑一定不能混用，包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異，還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如：有的廠家酶標板孔間CV值大于20%，標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差，使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。

要注意試劑的批號和出廠日期，雖然試劑的有效期多為1年，最好選擇剛出廠的試劑盒。

要注意試劑盒的保存條件，一定要按試劑盒規定的要求保存。

要注意實驗的操作要符合試劑盒說明書的規定，實驗前要詳細閱讀說明書

2．標本因素和操作因素

血清是常規的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種：

· 內源性物質

· 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。

· 外源性物質

· 外源性物質常常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

   所以，當ELISA測定結果與預期或文獻報導中不一致時，應該首先考慮試劑因素，這個是做好實驗獲得正確數據的前提保證，其次還有標本因素和操作因素等多方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為實驗提供正確可靠的檢測結果。